Se inicia el recorrido del museo con un cuadro que establece una comparación entre las culturas guatemaltecas y las del resto del mundo. Para la mejor comprensión del proceso del poblamiento de América, en esta sala se han reconstruido escenas que lo ilustran, emprezando con el paso por el Estrecho de Behring.

El mapa ejemplifica tres teorías sobre el poblamiento de América: la del Origen Autóctono, planteada por Florentino Ameghino, que ubica el origen del hombre en Argentina; la del Origen Múltiple de Paul Rivet, quien sostiene que el hombre proviene de las Islas Melano-Polinesias y Australia; y la del origen único de Alex Hrdlika, la más aceptada, propone que el hombre llegó a América atravesando el Estrecho de Behring.

Las siguientes vitrinas reconstruyen el habitat del hombre prehistórico en cuevas o abrigos rocosos estacionales; la cacería del mamut en las planicies, como Clovis y Folsom; y una muestra de restos óseos de animales prehistóricos de Guatemala. También se ejemplifica la formación de las primeras aldeas que utilizaron las técnicas agrarias de cultivo con bastón, quema y roza.